北京干细胞库

北京干细胞库服务条目

	干细胞建系
	干细胞多能性鉴定
	饲养层细胞的提供
	干细胞系的提供
	干细胞的入库长期保存
	相关技术培训
	支原体检测
	小鼠ES、iPS细胞嵌合能力检测
	小鼠转基因服务
	骨髓间充质干细胞（MSC）的鉴定

干细胞建系
北京干细胞库，基于自身的条件优势和多年的实践经验，愿为其他相关实验室提供技术支持和服务，推动我国干细胞领域的蓬勃发展。

1.	小鼠ES细胞建系可进行小鼠体外受精（IVF）和核移植（NT）来源的ES细胞的建系工作，在获得可以稳定传代的ES细胞的基础上进行全面系统的ES细胞多能性鉴定（详见“干细胞多能性鉴定”）。最终可提供正常培养ES细胞、一定数量冻存细胞，以及齐全的多能性鉴定、核型鉴定、支原体鉴定报告。

2.	小鼠iPS细胞建系可进行多品系小鼠iPS细胞的建系工作，在获得可以稳定传代的iPS细胞的基础上进行全面系统的干细胞多能性鉴定（详见“干细胞多能性鉴定”）。最终可提供正常培养iPS细胞、一定数量冻存细胞，以及齐全的多能性鉴定、核型鉴定、支原体鉴定报告。

3.	人iPS细胞建系根据提供的供体细胞，进行人iPS细胞的建系工作，在获得可以稳定传代的iPS细胞的基础上进行全面系统的干细胞多能性鉴定（详见“干细胞多能性鉴定”）。最终可提供正常培养iPS细胞、一定数量冻存细胞，以及齐全的多能性鉴定、核型鉴定、支原体鉴定报告。

4.	人疾病模型iPS细胞建系根据提供的不同病种病人来源的供体细胞，进行人iPS细胞的建系工作，在获得可以稳定传代的iPS细胞的基础上进行全面系统的干细胞多能性鉴定（详见“干细胞多能性鉴定”）。最终可提供正常培养iPS细胞、一定数量冻存细胞，以及齐全的多能性鉴定、核型鉴定、支原体鉴定报告。

干细胞多能性鉴定
ES和iPS细胞的研究价值主要在于它们的自我更新和向三胚层细胞分化的潜能，因此系统、全面、定期地鉴定ES和iPS细胞的多能性是必不可少的，是保证实验能顺利进行的基础，也是保证实验结果准确、可靠的基础。因此，北京干细胞库提供全面的干细胞多能性鉴定工作。

　　a. 小鼠干细胞的多能性鉴定

包括：	1. 传代能力及形态学鉴定 2. 特异性标记物鉴定 3. 多能性基因鉴定 4. 体外三胚层分化能力鉴定 5. 体内三胚层分化能力鉴定 6. 二倍体嵌合能力鉴定 7. 四倍体嵌合能力鉴定

　　b. 人来源干细胞的多能性鉴定

包括：	1. 传代能力及形态学鉴定 2. 特异性标记物鉴定 3. 多能性基因鉴定 4. 体外三胚层分化能力鉴定 5. 体内三胚层分化能力鉴定

饲养层细胞的提供
利用饲养层细胞是目前国际上公认的最可靠的培养小鼠干细胞和人来源干细胞的培养方法。稳定、可靠的饲养层细胞是进行ES或iPS实验的前提条件。因此，北京干细胞库提供标准统一的、对维持ES或iPS有稳定效果的饲养层细胞。该饲养层细胞经过支原体检测，无支原体。

干细胞系的提供
北京干细胞库提供已经建系的多种细胞株，包括小鼠IVF-ES细胞株、小鼠Path-ES细胞株、小鼠NT-ES细胞株、小鼠iPS细胞株、人孤雌胚胎干细胞株等及其他细胞株。具体获取流程请参考“细胞”部分内容。

干细胞的入库长期保存
北京干细胞库有完善的硬件支持，定期对细胞进行质量控制，细胞可长期保存于非接触式液氮罐，因此北京干细胞库愿意代为保存其他实验室的干细胞株等主要资源。具体申请入库流程请参考“细胞”部分内容。

相关技术培训
北京干细胞库不定期举办多种类型的技术培训班，以满足不同实验室及研究人员的不同需求。每期技术培训班针对一到两点实验技术要领进行详尽的讲解及准确的演示，并保证每位培训人员亲自动手操作，一方面强化理论知识的理解，一方面锻炼实际操作能力、掌握实验技术要领。各期培训班的主要致力于提高我国干细胞研究的整体水平，加强研究同行之间的交流和学习，为我国的干细胞研究发展提供有力的支撑。培训内容包括下面几个方面：

1.	临床级人胚胎干细胞的培养技术培训人胚胎干细胞因其具有自我更新和多分化潜能，一直被认为是最有潜力应用于临床的细胞资源。因此，掌握hES细胞的培养方法，是使其应用于临床的基础。长期以来，hES因其增殖速度慢、培养过程中容易分化等问题，一直是细胞培养中公认的难以长期维持其最佳状态的细胞种类，而且一直以来的培养体系中含有动物源性，限制了hES细胞的临床应用。鉴于此，本培训班首先着眼于“临床级”hES细胞的建立标准，并力争传授给大家最标准的hES培养体系，包括滋养层的制备、hES的传代、冻存、复苏、鉴定等一些技术细节。

2.	胚胎干细胞定向诱导分化技术培训胚胎干细胞的应用前景主要在于它能够向内中外三个胚层的细胞分化，因此了解ES的分化机制，利用适当的方法诱导其向某一方向分化，并将收获的分化细胞进行鉴定、在体移植实验，为其临床应用奠定基础，是本培训班的目的所在。

3.	小鼠iPS技术培训本培训班涉及iPS研究中各类技术手段和实验细节，从供体细胞的获得、病毒的制备、感染供体细胞到观察iPS克隆形成、挑取克隆以及传代培养，均有详细的讲解及学员动手操作实践。另外，四倍体补偿实验是检验iPS细胞是否具有发育多能性的“金标准”，在此培训班中也有准确的演示和动手实践机会。

4.	人iPS技术培训 hES细胞一直受到伦理学、免疫排斥等因素的制约，而iPS细胞的出现是干细胞研究领域一项新的重大突破。本培训班不仅会介绍iPS技术的新近进展，同时将主要关注iPS技术的基本操作和技术细节。从iPS供体细胞的获得到iPS细胞的鉴定都将详细介绍和准确演示。

支原体检测
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间的可独立生活的微生物，无细胞壁形态，可为圆形或丝状。支原体污染细胞后，培养基可以在很长时间内不发生明显变化，因此易被忽视。支原体感染细胞后能改变细胞的DNA、RNA及蛋白表达，因此在细胞培养过程中应该定期检测以预防支原体的污染。北京干细胞库提供灵敏、可靠的支原体检测方法：

1.	荧光染色法：能与DNA特异性结合的荧光染料Hoechst33258，能使支原体内含有的DNA着色，染色后用荧光显微镜观察，若荧光显微镜下观察到散在于细胞核周围或附着于细胞膜表面的蓝色小点或丝状物，则说明有支原体污染。

2.	支原体肉汤培养法：将待测培养基接种于支原体固体培养基中，置于需氧环境下培养，若有菌落形成，则说明有支原体污染。

小鼠ES、iPS细胞嵌合能力检测
小鼠ES和iPS细胞均需要二倍体嵌合和四倍体嵌合实验来证明其发育的多能性。二倍体嵌合能够证明干细胞有进入种系的能力，但是发育为一个完整的个体的能力还需要四倍体嵌合来证明。因此，北京干细胞库结合自身优势，提供二倍体嵌合和四倍体嵌合技术服务。

小鼠转基因服务
转基因小鼠的研发一般是通过DNA显微注射的办法，将外源目的基因注射到小鼠受精卵内，使外源目的基因整合到小鼠基因组；导入基因可以通过遗传传给子代。

北京干细胞库提供转基因小鼠技术服务，主要包括DNA显微注射、首代转基因小鼠（founder）的鉴定等内容。我们保证至少产生2个带有全部或部分转基因的首代小鼠，但不保证基因的表达和具有生殖系传递的能力。

骨髓间充质干细胞（MSC）的鉴定
北京干细胞库提供骨髓间充质干细胞的鉴定工作，包括CD73、CD90、CD34、HLA-DR等10种标记物的鉴定。